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植物材料直接PCR技术

技术文章:植物材料直接PCR技术 添加时间:2018-3-4 23:22:00

实例1:
1、截取1-2片0.5-0.7厘米的水稻叶片放入1.5ml 离心管中,加入100μl溶液L,确保叶片浸没在溶液中。 
2、95℃孵育10 分钟,此时DNA已释放但叶片并没有明显的消化。
3、加入100μl溶液I。Vortex混合。直接PCR。 
4、PCR反应体系配制:
PCR体系 体积
抽提物 4μl
2×PCR MIX 10μl
上游引物 1μl
下游引物 1μl
水 4 μl
总体积 20μl

5、在PCR仪上进行如下反应:
94℃ 3min
94℃ 0.5-1min
50-65 C 0.5-1min 30-35个循环
72°C 0.5-2min
72°C 10 min
6、8%聚丙烯酰胺胶电泳,银染。
1

实例2:
提取、PCR同实例1。检测用2%的琼脂糖。
2