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Murine RNase Inhibitor RNase抑制剂

产品专题:Murine RNase Inhibitor RNase抑制剂 添加时间:2018-3-4 23:47:02

RNase无处不在

在样品材料准备时,或RNA纯化时,亦或实验的反应体系配制的过程中,均有可能引入RNase的污染。RNase可谓是无孔不入,无处不在。RNase的来源主要包括实验人员的皮肤或唾沫等、枪头等在内的实验耗材及配制反应体系的各组分等。

关于RNase

RNase(Ribonuclease,核糖核酸酶)是一类能够催化RNA降解为小分子RNA的核酸酶,分为核糖核酸内切酶和核糖核酸外切酶。前者主要包括RNase A、RNase H等,后者主要包括RNase R等。

RNase——特别是RNase A家族的成员——是一些微小紧凑的蛋白,它们含有一些半胱氨酸残基能够形成许多分子内二硫键。因此在冷却至室温后,在无变性剂存在的条件下,变性的RNase会重新恢复其天然结构及部分功能。因此,RNase在反复冻融,甚至高压灭菌后仍会保留相当的活性。

RNase可降解RNA,即使痕量的RNase也会降低RNA的完整度。RNase是一类极度稳定、不易失活的RNA“天敌”。

关于RNase Inhibitor

在细胞内,为避免RNase对RNA的降解,RNA通常会被5’端“加帽”、3’端“加A”或者形成RNA-蛋白复合体。而在分子生物学实验时,避免RNase污染的最主要手段就是使用RNase Inhibitor。

RNase Inhibitor是人的胎盘中存在的一种特异性RNase抑制剂,能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体从而使RNase失活

Murine RNase Inhibitor

与人源RNase inhibitor相比,Murine RNase Inhibitor不含人源蛋白中的两个对氧化非常敏感的半胱氨酸,因而具有更高的抗氧化活性,且更加适合于对高DTT敏感性的实验(如qPCR)。翊圣生物在成熟的蛋白表达和纯化平台基础上,借助大肠杆菌表达系统,并通过离子交换和亲和层析而纯化获得纯度达95%的重组鼠源RNase抑制剂。

产品特点

广谱的RNase抑制活性:可抑制包括RNase A、RNase B、RNase C等在内的RNase。

兼容广泛的反应条件:在pH 5.0至9.0条件下和25℃至55℃的温度下都具有活性(60℃时仍保留部分活性)。

热稳定性的RNase抑制剂:适用于热稳定型逆转录酶(55℃-60℃)。

兼容广泛的下游实验:对SP6、T7或T3 RNA聚合酶,AMV、M-MLV逆转录酶和Taq DNA聚合酶酶活性无影响。

批间稳定性:成熟的蛋白表达和纯化平台,可大规模生产,保证批次间产品的稳定性。

质量控制

核酸外切酶残留检测:200U本品和0.6μg λ-Hind III在74℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:200U本品和0.6μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌残留DNA残留检测:50μL体系中,加入200U本品,以ddH2O为模板,扩增E.coli 16s rDNA基因。35个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。

纯度测试:经SDS-PAGE检测,纯度达95%以上。

产品应用

1. RT-PCR 逆转录合成cDNA。

2. qRT-PCR 实时荧光定量PCR保护RNA。

3. in vitro transcription/translation 体外转录和翻译系统中保护RNA。

4. 用于RNase保护实验。

5. 辅助制备无Rnase 的抗体等。

实验数据

 

 

图1. RNase inhibitor抑制RNase A活性,保护RNA完整性。

1μL RNA inhibitor可有效抑制5ng RNase。1μg HEK细胞总RNA电泳结果。

FAQ

1. Murine RNase inhibitor是否会影响RT-PCR和qRT-PCR实验?

答:不会影响。经质量测试,每批次Murine RNase inbitior均不含有基因组污染,可适用于RT-PCR和qRT-PCR实验。

2. 在使用Murine RNase inhibitor配制反应体系时,有什么注意事项?

答:配制体系时,在其他可能引入RNase污染来源的组分加入前,RNase inhibitor可首先加入。