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细胞示踪荧光探针

产品专题:细胞示踪荧光探针 添加时间:2018-3-4 23:44:35

 

一、线粒体探针

线粒体是一种存在于大多数真核细胞中的由两层膜包被的细胞器,直径在0.5-10微米左右。线粒体有“细胞动力工厂”之称,是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要场所,主要为细胞活动提供能量。另外,线粒体还承担了许多其他生理功能,如调节膜电位并导致细胞凋亡。线粒体膜通透性增加也能使诱导凋亡因子(AIF)等分子释放进入细胞质基质,破坏细胞结构。

1.MitoTracker® 线粒体示踪

MitoTracker系列探针专用于检测活细胞线粒体,具有细胞通透性,易于在有活性的线粒体中积累。一旦线粒体被标记,细胞就能用甲醛固定剂固定,一些MitoTracker探针能在固定之后保留在线粒体内。尽管传统的线粒体探针如Rhodamine 123也很容易标记线粒体,但是一旦线粒体的膜电位损失,它们就很容易被洗掉。

MitoTracker系列探针具有多种颜色,适合于多色标记实验。MitoTracker Green FM 是线粒体绿色荧光染料,这种染料定位于线粒体的能力看起来不受线粒体膜电位影响。 该染料可以对活细胞进行染色,但是乙醛固定后不能稳定保存。 MitoTracker Red CMXRos 是一种红色荧光染料,用于对活细胞线粒体进行染色,并且该染料的积累取决于膜电位。 乙醛固定后,该染料可稳定保存。MitoTracker Red CM-H2XRos 是 MitoTracker Red 的非荧光还原态,在氧化时才会发出红色荧光。该染料也可以对活细胞线粒体进行染色并且其积累取决于膜电位。 乙醛固定后,该染料可稳定保存。但是,该染料在体外发生氧化反应,就不能检测到荧光,所以要求保存在惰性(如氮气)气体中。MitoTracker® Deep Red FM 是一种远红荧光染料(Ex/Em约为 640/662 nm),用于对活细胞线粒体进行染色,并且该染料的积累取决于膜电位。 乙醛固定后,该染料可稳定保存。

 

Yeasen货号

产品名称

Ex/Em(nm)

是否可以固定

规格

价格(元)

40740ES50

MitoTracker® Red CM-H2XRos

线粒体红色荧光探针

579/599

Yes

50µg

359.00

40741ES50

MitoTracker® Red CMXRos

线粒体红色荧光探针

579/599

Yes

50µg

359.00

40742ES50

MitoTracker® Green FM

线粒体绿色荧光探针

490/516

No

50µg

359.00

40743ES50

MitoTracker® Deep Red FM

线粒体深红色荧光探针

644/665

Yes

50µg

359.00

 

2.早期凋亡检测(线粒体膜电位检测探针)

在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏,这被广泛认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光染料如 Rhodamine 123、JC-1、JC-10等可结合到线粒体基质,其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针,表现出电势依赖性的积聚在线粒体内。正常线粒体内,JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=585 nm, Em=590 nm);而凋亡细胞,线粒体跨膜电位去极化,JC-1从线粒体内释放,浓度降低,逆转为发射绿色荧光的单体形式。因此颜色的变化非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。线粒体的去极化程度也可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。JC-1的流式检测是比较常见的一种方法。

Yeasen货号

产品名称

规格

价格(元)

40705ES03

JC-1 线粒体膜电位荧光探针

1mg

615.00

40705ES08

JC-1 线粒体膜电位荧光探针

5mg

2450.00

40706ES60

JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

100T

800.00

40707ES03

JC-10 线粒体膜电位荧光探针

1mg

680.00

40707ES08

JC-10 线粒体膜电位荧光探针

5mg

2763.00

40752ES60

JC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit  JC-10线粒体膜电位检测试剂盒

100T

1600.00

40333ES76

CCCP (10 mM) 细胞凋亡诱导剂CCCP(10 mM)

500μl

 

 

3.线粒体与活性氧检测

活性氧,Reactive Oxygen Species(ROS)包括3种含氧的自由基:羟自由基(·OH),超氧阴离子(O2·),氢过氧自由基(HO2);2种过氧化物:过氧化氢(H2O2)和过氧化脂质(ROOH);以及一种含氮的氧化物(NO)。

活性氧(ROS在通路中的作用:

1)建立宿主自身防御系统,调节基因表达,促进细胞生长和分化,有利于干细胞增殖、神经保护等;

2)浓度过高会引起细胞凋亡,细胞损伤,脂质和蛋白过氧化等。

活性氧(ROS)的主要来源:

1)线粒体的氧化呼吸链;2)NADP氧化酶;3)细胞色素P-450。

验证ROS是否来自线粒体的方法?

当线粒体产生过量ROS的时候,必然导致线粒体本身的正常结构和物理状态发生变化,常见的比如线粒体膜完整性和膜电位的缺失。

(一)Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧(ROS)检测试剂盒

活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种基于荧光染料DCFH-DA(2,7-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate)的荧光强度变化,定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。

DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜,因此探针很容易被积聚在细胞内。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在最大激发波长480nm,最大发射波长525nm处,使用荧光显微镜,流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号,并根据阳性对照Rosup的荧光信号来分析活性氧的真正水平。

Yeasen货号

产品名称

规格

价格(元)

50101ES01

Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit

活性氧(ROS)检测试剂盒

1 kit (100 ~ 500 tests)

325.00